ELISA实验标本收集处理事项

2023年07月31日 16:20:47来源：上海抚生实业有限公司

　　做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。

　　一、标本收集注意事项：

　　1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

　　2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。

　　3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

　　4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。

　　5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。

　　6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。

　　7.收集标本时，应该做好防护措施(比如戴手套，口罩，护目镜等)，认为所有标本都具有一定的潜在危险性。

　　8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。

　　样本正确的处理方法应该是这样的：

　　二、标本处理办法：

　　1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离

　　心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)

　　保存。

　　3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。

　　注：样品稀释的一般原则

　　ELISA实验加样时可能遇到的问题：

　　1、过长(特别是室内温度较高时)。

　　2、手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间。

　　3、加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外，血清或血浆标本分离不好即进行加样。

　　ELISA实验相应解决办法：

　　1、标本为血清：将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟。

　　2、标本为血浆：须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟。

　　3、若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。

　　4、加样后及时放入孵箱。

　　5、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

　　6、如果采用AT或其他全自动加样，选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。

　　7、标本较多时，请分批操作。

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